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微生物和細(xì)胞生長(zhǎng)的光密度(OD)測(cè)量是微生物學(xué)及生物發(fā)酵實(shí)驗(yàn)室中最常用的方法之一,用于在進(jìn)行蛋白表達(dá)或監(jiān)測(cè)培養(yǎng)過(guò)程時(shí)確定收獲的最佳時(shí)間。細(xì)胞、細(xì)菌或酵母在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況(細(xì)胞密度、細(xì)菌生長(zhǎng)、酵母生長(zhǎng))通常通過(guò)測(cè)量600nm下的光密度(OD600)來(lái)獲得。OD600測(cè)量通常用于確定細(xì)菌培養(yǎng)物的生長(zhǎng)階段,這些測(cè)量有助于確保在適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度下收獲細(xì)胞。
由于OD600測(cè)量的光密度是由光散射而非光吸收引起的,因此細(xì)胞的大小和形狀以及死細(xì)胞和碎片可能會(huì)增加光散射。因此,當(dāng)在相同的儀器上測(cè)量時(shí),處于相同密度水平(如Cells/mL)的不同細(xì)胞類型可能顯示出不同的OD600值。 朗伯-比爾定律與OD600 OD600讀數(shù)的差異 OD600校正值公式 NanoPhotometer?或OD600 DiluPhotometer?等儀器默認(rèn)“校正系數(shù)”為1,如使用相應(yīng)方法進(jìn)行調(diào)整,將有助于在不同設(shè)備之間提供可比較的結(jié)果。 OD600校正因子= 設(shè)備1測(cè)量值 / 設(shè)備2測(cè)量值 通常建議使用試管或比色皿進(jìn)行OD600測(cè)量,以確保讀數(shù)的穩(wěn)定性,較大體積樣品提供了更大的濁度平均值,誤差相對(duì)較小。此外,為了防止菌體沉降過(guò)快,并給出隨時(shí)間變化的OD讀數(shù),可向樣品中添加甘油。對(duì)于一些很小的樣品量要求,使用微滴進(jìn)行測(cè)量,也是可行的,特別是NanoPhotometer?的樣品壓縮法,在液膜中測(cè)量,可避免液柱中顯著的沉降現(xiàn)象。但需注意在上樣前樣品的充分混勻。 為了減少OD600測(cè)量所需的體積,并避免耗時(shí)且容易出錯(cuò)的手動(dòng)稀釋,可以使用特殊的比色皿。Implen的DiluCell?自動(dòng)稀釋比色皿可降低樣品體積要求,并提供自動(dòng)虛擬樣品稀釋。由于DiluCell?的獨(dú)特設(shè)計(jì),光路從標(biāo)準(zhǔn)的10毫米減少到1毫米(DC 10)。根據(jù)朗伯-比爾定律,光程因子為10。使用DiluCell?自動(dòng)稀釋可節(jié)省時(shí)間,并排除稀釋誤差和交叉污染。 德國(guó)Implen提供多種OD600測(cè)量解決方案,包括應(yīng)用于基礎(chǔ)測(cè)量和高級(jí)工藝開發(fā)的不同機(jī)型,具有可靠的測(cè)量結(jié)果和豐富的軟件功能,以及合規(guī)性功能,能夠充分滿足不同用戶的需求。OD600測(cè)量,認(rèn)準(zhǔn)德國(guó)Implen。
